PCR反応のための標準的なプロセス

標準PCRプロセスは3つのステップに分けられます。

DNA変性 :( 90 ℃ -96 ℃): 二本鎖DNAテンプレートは、熱作用下で水素結合切断を受け、一本鎖DNAを形成します

アニーリング :( 60 ℃ -65 ℃): システム温度が下がると、プライマーはDNAテンプレートに結合し、局所的な二本鎖を形成します。

エクステンション :( 70 ℃ -75 ℃): Taq酵素の作用下 (72 ℃ 前後、最高の活性) で、dNTPが出発物質として使用され、プライマーの3' 末端から5' → 3' 末端の方向に伸びて、鋳型に相補的なDNA鎖を合成する。

変性、アニーリング、および伸長の各サイクルの後、DNA含有量は2倍になります。今日では、増幅領域が短いためにTaq酵素活性が最適でなくても、一部のPCRは短時間で複製できます。したがって、60 ℃ から65 ℃ の間で同時にアニーリングとストレッチを含む2ステップの方法を使用して、1つの温度上昇を減らし、プロセスを減らし、反応速度を向上させることができます。

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